单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,（二）原理：,培养基,是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质它包括碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等营养要素由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基培养基的制备原则：,1.,根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基2.,调配好培养基营养成分的浓度和比例3.,控制微生物的培养条件（渗透压、,pH,、氧化还原电位等）,细菌 牛肉膏蛋白胨,放线菌 高氏,1,号,真菌 查氏、马丁氏,各类,M,土豆葡萄糖,（三）器材：,1.,药品和试剂：,牛肉膏、蛋白胨、琼脂、,NaCl,、,1M NaOH,溶液2.,器材：,试管、烧杯、量筒、玻璃棒、铁架台、漏斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、,pH,试纸（,5.5-9.0,）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等四）步骤：,以固体斜面培养基制作为例,：,计算 称量 加热融化 调,pH,过滤（可省略）,分装 加塞（附棉塞制作）,包扎,灭菌 摆斜面 无菌检查,1.,称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。
对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量2.,配制 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦一般要求琼脂沸腾,3,次，完全熔化后，补足所失水分3.,调节,pH,值 培养基溶解均匀后用,pH,试纸测,pH,，然后根据要求加酸或碱（一般用,1M HCl,和,1M NaOH,），要缓慢少量且多加搅拌培养基配方为自然,pH,时，不用调节4.,过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去5.,分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞固体培养基要趁热装分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染分装量如下：（,1,）固体斜面培养基：装量为管长的,1/5,2,）液体培养基：装量为管长的,1/4,3,）半固体培养基：装载量为管长的,1/3,6.,灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌培养基做完后，要求在,2-4,小时内灭菌，否则会被污染7.,摆斜面,灭菌完毕，冷却到,60,左右再摆斜面，以免产生过多冷凝水五）注意事项：,1.,称量要准确，取药品的角匙不能混用2.,加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出。
每加热,30s,看一次）,3.,蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速4.,培养基中如有微量成分，先配成浓缩溶液后再加入5.,节约药品牛肉膏蛋白胨培养基,(g/L),牛肉膏,3g,蛋白胨,10g,NaCl 5g,琼脂 固体培养基为,18g,；,半固体为,10g,；液体不加水,1000ml,pH 7.0-7.2,121,灭菌,20min,棉塞制作,二、消毒灭菌：,物理法：加热、过滤、照射,化学法：化学药品,灼烧,干热,湿热,加热,高压,间歇,煮沸,原理：,加热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质变性达到灭菌的目的干热：,160-170C 1.5-2h,湿热：,121.3C 15-30min,紫外线灭菌是诱导胸腺嘧啶二聚体的形成，而抑制了,DNA,的复制另外，电离过程中生成的,O,3,和,H,2,O,2,均有杀菌作用适用范围,湿热主要用于各类培养基及液体物质,干热主要用于玻璃、金属等器皿、工具,紫外线主要用于接种箱、无菌室内空气及物体表面灭菌,操作步骤：,1.,湿热灭菌（高压蒸汽）,向锅内加入适量的水 装待灭菌物品 加盖,加热 排冷空气 升压、升温 维持所需,温度,20-30min,降压、降温 开盖取物,趁热摆斜面,2.,干热灭菌（干燥箱）,将待灭菌物品包好 装入待灭菌物品 升温,恒温 降温（,70,以下）开箱取物,3.,紫外线灭菌（接种箱或无菌室内）,放入待灭菌物品 甲醛（酒精）熏蒸,开紫外线灯（,30min,）关灯 工作,注意事项：,1.,高压灭菌：切勿脱水工作，排净冷空气，工作人员不能远离，当压力降到“,0”,时再开盖取物。
2.,干热灭菌：物品不要与烘箱内壁铁板接触；温度不能超过,170,；待温度降至,70,以下后，再开盖取物3.,紫外线灭菌：待灭菌物品要单摆开，不要直视紫外线光，更不能在紫外线光下工作灭菌后通风，排出,O,3,。
