单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床分子诊断与个体化治疗,分子诊断,狭义分子诊断：,应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为分子诊断，包括肿瘤分子诊断、传染病分子诊断、产前诊断等广义分子诊断：,指应用分子生物学方法，对受检者体内各类生物分子（包括,DNA,、,RNA,、蛋白质等）进行定性和定量分析，确定其结构或表达水平，从而为个性化预防、治疗提供依据的一种诊断技术，包括肿瘤分子诊断、传染病分子诊断、产前诊断、单基因诊断、易感基因检测以及天赋基因检测等PCR,国内回顾,1990,年,:PCR,技术在国内开始用于临床检测,90,年代中期,:,假阴性,?/,假阳性,?,引发思考,1996,年,:,卫生部科研课题,1998,年,3,月,20,日,:,临床,PCR,实验室管理专家咨询会,1998,年,4,月,16,日,:,卫生部下发,国内回顾,2,1999,年,4,月,29-30,日,:,针对临床开展,PCR,检验的问题,达成八点意见,.,1999,年,8,月,17-24,日,:(,在北京卫生部临床检验中心举办,.,2002,年,1,月,14,日,:,卫生部下发,(,卫医发,200210,号,),2010,年,:,医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法,（卫办医政发,【2010】194,号）,医疗机构临床基因扩增检验室工作导则,（卫办医政发,【2010】194,号）,截止到,2014,年,1,月，全国按照所制定的标准通过验收的临床基因扩增检验实验室共,2670,余家。
采用所编写的培训教材和培训模式共举办了培训班,280,多期，培训实验室技术人员,21000,多人涉及全国,28,个省、直辖市和自治区目前国内临床分子诊断现状,绝大部分用于病原体核酸检测,较少部分用于遗传病的产前诊断,个体化用药的分子诊断正在兴起,一些常见的认识误区,临床实验室,=,检验科,基因（遗传携带、突变等）与病原体核酸检测,完全不同,临床,PCR,检验在,病理科,、,药剂科,或,肿瘤科,做，不属于临床检验管理？,必须达成一点共识：实验不管在哪做，都属于检验管理，必须有严格的质量控制问题与思考,问题：,应用,实验室分区,质量管理：分析前，分析中，分析后,人员,：（医生、实验室技术人员）：均需,“,洗脑,”,严格的培训,出现问题，即分析问题产生的原因，采取措施加以改进,质理管理的习惯养成需要时间几个策略比较,家族病史研究与基因研究相比较,说法不一，孰优孰劣？各有所长肿瘤早期诊断带来的真正收益有没有我们所希望的那么大？,WHO has developed three principles for cancer issues,Current prevention strategies could block up to one-third of all new cancer,Improved early sreening could result in the detection of one-third of cancer at an early stage,。
A comprehensive treatment could improve survial aquality another one-third of pattients with cancer,国家自然科学基金委医学部主任、国家肝癌科学中心主任,王红阳院士，,中国肿瘤治疗现状,治愈率,130mg/dl,、,HCV RNA600000U/ml,预期治愈率可能大于,80%,个性化检测的局限性,一些疾病是由一个或多个基因突变引起,基因检测方法确实能对这些疾病的患病风险、确诊和治疗起指导作用,大多数疾病发生、发展及预后可能涉及更多的基因以及这些基因和环境因素相互作用,仅通过基因检测盒基因表达谱的检测有很大局限性,CLIA,：分子检测有关的主要质控要求,对于每一个检测系统，实验室由此又控制程序的责任,监控整个分析过程的准确性和精密度42 CFR 493.1256,（,A,）,),控制程序必须是：,o,检出即时误差,由检测系统故障、不利于环境和操作者能力导致,(42 CFR 493.1256,（,C,）（,1,）,),o,监控检测性能的准确性和精密度,检测系统能和环境的改变以及操作者的能力都可能会影响检测性能。
实验室必须确定使用检测物质的数量、类型和频率，如果适用，由实验室验证或建立性能规范,(42 CFR 493.1256,（,b,）,),如果实验室引进了未经,FDA,认可或批准的检测系统,包括自主研制的方法,在报告病人检测据结果前，必须建立检测系统的性能规范，如果适用，包括下面的性能特征：,o,准确性，,o,精密度，,o,分析灵敏性，,o,分析特异性，包括干扰物质检测系统对检测结果的可报告区间，,o,参考区间（正常值），和,o,检测性能要求的其他性能特征42 CFR 493.1253,（,b,）（,2,）,),包括提取过程中的检测系统包括两种质控物质，其中之一可以检出提取过程的错误42 CFR 493.1256,（,d,）（,3,）（,iv,）,),每一扩增过程，包括两种质控材料，如果反应的抑制是假阴性结果的重要来源一个质控材料能够检出该抑制作用42 CFR 493.1256,（,d,）（,3,）（,v,）,),国际相关机构的,PT,计划,CAP,美国病理家协会,CDC,美国疾病预防控制中心（基因检测质量控制物计划,GTQC,）,QCMD,分子诊断的质量控制,EMQN,欧洲分子遗传实验质控网,ENVID,欧洲重要病毒性疾病诊断网,EQAP,西班牙室间质评计划,EQUAL,欧盟质量控制一致行动（现在被称作分子诊断的质量控制,QCMD,）,INQAT,意大利肿瘤标志物质量保证网,NEQAS,英国国家质量保证计划,临床基因扩增实验室的质量控制（一）,实验室各种常规工作的规章制度,实验室技术人员的生物安全制度和保护措施,防止实验室,PCR,交叉污染的实验（每月一次）,实验室的清洁和消毒制度（每周,4-5,次）,实验室的原始数据、报告单的归档和信息保密制度,实验室专业人员的培训和考核制度,实验室结果差错的记录和纠正措施,计算机的系统维护和管理制度,临床基因扩增实验室的质量控制（二）,样本接收和拒收标准：抗凝剂，采集时间,/,量，病史。
接收标本必须有专用的登记表，并核对样本登记表中的所有信息，,2,人复核和签字每批样本核酸提取的过程中加入质控标本以保证标本处理的过程中的正确性，同时建立用于不同技术平台的标准化的,DNA/RNA,浓度范围定量,PCR,检测的操作过程包括,4,个不同浓度的对照物，以及阴性和阳性对照样本的保存和存储（,4,和,-80,冰箱）,临床基因扩增实验室质量控制（三）,室内质控标本的来源：包括参加国内和国际质控标本，细胞株和已知实验结果的样本在每批实验中和每个技术平台上均加入了质控样本，从样本抽提，基因扩增，杂交和测序已知跟踪到整个实验结果，每次实验结果分析后有专门的质控报告实验室的技术人员每一个月，在每一个技术平台上都有一次盲样样本的质控实验，并以此评价技术人员的实验技能分析的有效性,准确性,o,与参考方法比较,o,设定,CUT-OFF,值的方法,精密度,/,再现性,o,重复性：利用分子检测方法和同一个仪器对单个样本进行重复性研究o,再现性：再现性研究评估天与天、操作与操作间的精密度、如果使用多个仪器，要评估仪器与仪器之间的再现性；如果在多个实验室开展检测，也要评估不同实验室间的再现性O,靠近临床,cut-point,和整个分析检测区间内的性能,分析的线性、回收率和高剂量钩子效应,检出限值和定量限值（在高和低的范围内）,分析特异性（交叉反应，干扰）,基质效应,影响分析结果的分析前因素,分析输出（读数区间或阴阳性）,临床有效性和临床有用性,临床有效性：检测特性（敏感性、特异性、预测值和拟然比）,临床有用性：利用检测结果可以获得有效治疗或其他具体的临床获益,筛选有症状个体的检测：基因,LRRK2-G2019S,突变帕金森症。
用于诊断和监控的检测：,Heptimax-,由,Quest Diagnostics,研制的实验室自制检测该检测用于确认活动性丙肝病毒（,HCV,）感染、监控,HCV,治疗反应和确认感染的消退确定预后和指导治疗的检测：,OncotypeDX,利用实时荧光定量,PCR,检测乳腺癌肿瘤组织样本中,21,个基因的表达水平调整用药剂量的检测：指导华法林剂量的基因检测,-,基因,CYP2C9,（编码细胞色素,P4502c9,）和,VKORC1,（编码维生素,K,环氧化物还原酶复合物亚单位,1,）的多态性病理说明：,1.,包括“尸体病理学诊断”、“细胞病理学检查与诊断”、“组织病理学检查与诊断”、“分子病理学技术与诊断”、“特染和免疫组织化学染色与诊断”、“电子显微镜技术与诊断”和“其他”项目七个部分，共计,53,项检验说明：,1.,包括“临床血液学检验”、“临床体液检验”、“临床化学检验”、“临床免疫学检验”、“临床微生物与寄生虫学检验”和“临床分子生物学检验”项目六个部分，共计,1104,项2.,组织器官移植所需的各项检验（如,HLA,检查等）列入“临床血液学检验”类的“血型、输血及人类组织相关性抗原检验”类中。
3.”,实验室诊断,”,中的项目不含静脉采血，需单独收费，但微量采血管（指尖采血、耳垂采血）包含在各检验项目中，不得单独收费四）分子病理学技术与诊断,BDAA0001,组织部,/,细胞原位杂交检查诊断,石蜡包埋组织，新鲜冷冻组织，细胞涂片，组织切片机切片，进行二甲苯脱蜡，系列乙醇水化，微波炉、高压锅及蛋白酶处理，标记探针杂交反应，洗涤，酶或亲和物结合反应，显色，判读结果，含上述过程中所产生的废液、废物的处理BDAB0001,组织部,/,细胞荧光原位杂交检查诊断,荧光素标记探针杂交反应（一种探针）BDAB0002,组织部,/,细胞多色荧光原位杂交检查诊断,荧光素标记探针杂交反应（二种或以上探针）,.,BDAB0003,组织部,/,细胞荧光原位杂交技术计量分析诊断,荧光素标记探针杂交反应（二种或以上探针），图像定量分析BDAC0001,组织部,/,细胞原位脱氧核糖核酸（,DNA,）多聚酶链式反应检查诊断,原位,PCR,反应，亲和物结合，显色，复染，观察，诊断BDAD0001,组织部,/,细胞原位核糖核酸（,RNA,）多聚酶链式反应检查诊断,原位逆转录,PCR,反应，亲和物结合，显色，复染，观察，诊断。
BDAE0001,组织部,/,细胞荧光定量脱氧核糖核酸（,DNA,）多聚酶链式反应检查诊断,甲醛固定组织，石蜡包埋组织，新鲜或冷冻组织，离心收集细胞；组织粉萃机匀浆化，组织裂解，经反复离心及相应化学试剂去除蛋白，回收,DNA,，于荧光,PCR,仪进行荧光素,PCR,反应，分析结果，诊断BDAF0001,组织部,/,细胞荧光定量核糖核酸（,RNA,）多聚酶链式反应检查诊断,回收,RNA,，于于荧光,PCR,仪进行荧光素逆转录,-PCR,反应，分析结果，诊断BDAG0001,肿瘤组织脱氧核糖核酸（,DNA,）测序,PCR,反应产物琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳，产物纯化，测序反应，于,DNA,测序仪分析，观察结果，诊断甲醛固定组织，,石蜡包埋组织，新鲜或冷冻组织，血液或体液的处理，,DNA,提取，,PCR,反应及最后的测序反应纯化临床分子生物学及细胞遗传学检验,CLAY8000 HIV-,核糖核酸扩增定量检测,CLAZ8000 HIV-,核糖核酸非扩增定性检测,CLBA8000,分枝杆菌菌种鉴定,CLBB8000,结核,/,非结核分枝杆菌核酸检测,CLBC8000,巨细胞病毒脱氧核糖核酸扩增定性检测,CLBD8000,巨细胞病毒脱氧核糖核酸扩增定量。
